ATAC-seq技术,全称为:Assay for Transposase-Accessible Chromatin with high throughput sequencing),是2013年由斯坦福〒大学William J. Greenleaf和Howard Y. Chang实验室开发的一种用于研究染色质可及性(通常也理解为染色质的开放性)的方法(Buenrostro, Giresi, Zaba, Chang, & Greenleaf, 2013)。
该方法通过超活化Tn5转座酶将序列接头插入到染色质开放区域,然后通过DNA测序数据分析推断染色质各区域的可及性、转录因子结合位点以及核小体位置。ATAC-seq可以在全基因组范围快速灵敏地检测染色质可及性。
相比传统方法,ATAC-seq的结果ξ具有很强的一致性,同时也和基于组蛋白修饰marker的ChIP-seq有较高的吻合程度。另外,ATAC-seq的重复性,比MNase-seq和DNase-seq的更强,操作起来也更加简ζ 单,细胞或组织的需求量较少,出来的信号更加漂亮。已是目前研究染色质开放性首选的技术方法。
ATAC-seq简要实验流程
1. 收集细胞或组织,制备细胞悬液;
2. 加入细胞膜裂解液,获得细胞核;
3. 加入Tn5转座酶,对处于开放状态的DNA进行酶切;
4. 回收酶切下来的DNA片段,PCR扩增后进行二代高通量测序。
首先利用fastqc软件对原始数据进行质量评估,再使用BWA或bowtie软件将原始数据比对到参考基因组,然后用MACS分别对每例样本进行峰挖掘(peak calling),之后对peaks区域进行基因组位置注释、motif分析,并对靶基因进行GO和KEGG富集分析;若具有多种实验组样本,可挖掘各组样本间具有差异的peaks进◤行特异性分析等。
细胞样品
单次ATAC-seq反应所需细胞应当严格控制在100,000个/管(每个样本准备3~4管),具体细节详询销售。
动物组织
选取新鲜组织,质量大于30mg/份,取样时剔除冗余部分,保证组织的单一性,建议取材后用生理盐水漂洗,以去除血渍和污物↑,液氮速冻,-80℃保存。建议样⊙品制备 2~3 份。
植物组织
选取取幼嫩组织,如嫩叶,根尖,幼苗等,质量大于500mg/份,建议取样后用清水漂洗去除污物,纸巾吸干水分后液氮速冻,-80℃保存。建议样品制备 2~3 份。
具体细节,详询销售或技术人员。